白藜芦醇对大鼠骨髓内皮祖细胞增殖活性的影响

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的采用密度梯度离心分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs),观察白藜芦醇对EPCs增殖活性的影响。方法首先采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞,去除非贴壁细胞,培养14 d后获得EPCs。随后免疫荧光法测定细胞表面血小板-内皮细胞粘附因子(CD31)、血管性血友病因子(vWF)、血管内皮生长因子受体(FLK-1)、白细胞共同抗原(CD45),行Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-AC-LDL)和异硫氰酸荧光素荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)双摄取实验,以及基质胶(Matrigel)管状形成实验,鉴定EPCs。运用CCK8法检测细胞增殖活性,采用不同浓度(5、10、25、50、100μmol/L)白藜芦醇干预EPCs 48 h,以及白藜芦醇在不同时间(24～72 h)干预EPCs,分别检测细胞增殖活性。结果大鼠骨髓单个核细胞分离后,经诱导培养14 d后,呈现"鹅卵石样""铺路石状"外观。超过90%细胞表面表达CD31、vWF、FLK-1,能摄取DiI-AC-LDL和结合FITC-UEA-1,可在Matrigel胶中形成管状结构,经上述方法证实,本实验所分离培养的细胞为大鼠EPCs。与对照组比较,干预48 h,白藜芦醇呈浓度依赖性(5～50μmol/L)增强EPCs增殖活性(P均<0.01)。50μmol/L白藜芦醇干预EPCs 24 h～72 h后,EPCs的增殖活性呈现时间依赖性增强。结论采用密度梯度离心法分离培养及免疫荧光法鉴定细胞,证实为大鼠骨髓内皮祖细胞;进一步证实白藜芦醇可增强内皮祖细胞的增殖活性,为后续研究白藜芦醇的心血管保护机制奠定实验基础。

【关键词】 白藜芦醇 内皮祖细胞 增殖 骨髓 大鼠

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